城市恢复平静后,反派重整旧军卷土重来,与外星邪恶势力兰格勾结,试图称霸地球。少年忍者神龟莱昂纳多(彼得·普洛塞克饰演的彼得·普洛塞克)、拉斐尔(阿兰里奇森饰演的阿兰里奇森)、多那太罗(杰瑞米·沃德饰演的杰瑞米·霍华德)和米开朗基罗(诺埃尔菲舍饰演的诺尔·费舍)以及女记者阿贝尔·奥尼尔(梅根福克斯饰演的梅根·福克斯)、韦恩·芬威克(威拉内特·威尔·阿奈特饰演)和蒙面义警凯西·琼斯(斯蒂芬·斯蒂芬卡瓦饰演)并肩对抗反派。石(布里安提·布里安提饰)越狱后,与疯狂科学家巴克斯特·托克曼(泰勒佩里·泰勒·佩里饰)以及他的两个笨拙的左膀右臂猪脸和牛头联手,发布了一个控制世界的恶魔计划。当海龟们与史和他的伙伴们战斗时,他们发现自己面对的是一个更加邪恶的坏蛋格兰特,而海龟们将在宇宙层面上面对一个强大的对手。
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